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直接PCR（Direct PCR）是一种不经核酸提取而直接使用动物或植物组织等直接举行扩增的反应。。 。。。在许多方面，，，，直接PCR的事情方法类似于通例PCR。。 。。。
主要区别是直接PCR中使用的定制缓冲液，，，，样本可不经由核酸抽提，，，，直接举行PCR反应，，，，但关于加入直接PCR反应的酶的耐受性和buffer的兼容性有相对应的要求。。 。。。
只管常见的样品中或多或少都会保存PCR抑制剂，，，，但在酶和buffer的作用下直接PCR仍可实现可靠的扩增。。 。。。而古板的PCR反应需要以高质量的核酸为模板举行反应，，，，如模板中含有卵白以及其他杂质时就会抑制PCR反应的顺遂举行。。 。。。直接PCR是现在分子诊断领域较量热门的手艺之一。。 。。。
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直接PCR最初用于动植物
直接PCR最早应用的领域是动植物领域，，，，好比鼠、猫、鸡、兔、羊、牛等动物的血液、组织和毛发；；植物的叶片和种子等，，，，用来研究基因分型、转基因、质粒检测、基因敲除剖析、DNA泉源判断、物种判断、SNP剖析等领域。。 。。。
这些领域有一些配合的特点，，，，那就是目的基因的含量较量高，，，，核酸提取贫困，，，，以是直接PCR不但能够节约时间，，，，对效果的影响很小�。 。。。�，，，同时也能节约本钱。。 。。。
直接PCR用于病原体检测，，，，是近几年的事，，，，部分PCR试剂厂商在做立异的时间朝着这个偏向做了许多的起劲，，，，尤其是这次新冠疫情，，，，市场上泛起了许多这样的检测产品！
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直接PCR需要的试剂
样本裂解液
样本裂解液可以自己设置，，，，也可以购置。。 。。。差别品牌裂解液组份的差别会使得裂解能力各有差别，，，，进而裂解时间稍有差别。。 。。。好比说动物组织样本制备，，，，一样平常推荐30min或住宿裂解，，，，针对病毒类的裂解液在3-10min不等。。 。。。
PCR master mix
建议使用热启动DNA聚合酶，，，，增强特异性扩增，，，，扩增能力也更强。。 。。。直接PCR的焦点就是具有高度耐受的聚合酶。。 。。。
扫除或抑制样本中影响DNA扩增的组份
样本在经由裂解液处置惩罚之后，，，，会释放出卵白质、脂质和其他细胞碎片，，，，这些物质会抑制PCR反应，，，，因此直接PCR需要加入响应的扫除或者抑制剂来削弱这部分因素的影响。。 。。。
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直接PCR五大知识点荟萃
第一、Direct PCR手艺是针对种种生物样品的直接PCR手艺。。 。。。该手艺条件下，，，，无需对核酸举行疏散提取�。 。。。�，，，直接以组织样本为工具，，，，加入目的基因引物举行PCR反应。。 。。。
第二、Direct PCR手艺不但仅是古板的DNA模版的扩增手艺，，，，也包括RNA模版的逆转录PCR。。 。。。
第三、Direct PCR手艺不但仅是直接对组织样本举行通例定性PCR反应，，，，还包括Real-Time qPCR反应，，，，这就要求反应系统具备极强的抗配景荧光滋扰能力以及对内源性荧光淬灭剂的拮抗能力。。 。。。
第四、Direct PCR手艺针对的样本，，，，只需要核酸模版的释放，，，，并差池滋扰PCR反应的卵白、多糖、盐离子等举行去除，，，，这要求反应系统中的核酸聚合酶和PCR Mix具有极佳的抗逆性和顺应性，，，，能够在重大的条件下包管酶活性和复制准确性。。 。。。
第五、Direct PCR手艺针对的组织样品未经任何核酸富集处置惩罚，，，，模版量少少，，，，这就要求反应系统有极高的迅速度和扩增效率。。 。。。
参考资料：翊圣生物、赛默飞生命科学等
本文文章泉源：IVD从业者网 转自搜狐网，，，，不代表008PG国际医疗看法，，，，若有侵权，，，，请实时联系删除。。 。。。
